显微镜的分辨率是它能够形成线条或点的单独图像。它是根据对象细节之间的实际距离来定义的。光的波浪性质对可见光的约半波长，约250纳米或四分之一微米的白光显微镜的分辨率提出了实际和理论上的限制。这也将最高有用放大倍数限制在1000x-2000x的范围内。
分辨率仅取决于物镜，因为目镜只是放大物镜的光线。除了光学质量之外，物镜捕获的光锥宽度决定了它的分辨率。这取决于其设计以及样品和物镜之间是否使用了油。广角设计和油浸能力都将提高物镜的分辨能力。在任何情况下，它都不能超过上述可见光谱的限制。
要计算图像比例，您需要以度为单位使用显微镜物镜的视在视野。由于图形通常不可用，图像比例可近似如下计算：典型光学显微镜（以毫米为单位）的视场大小约为200除以放大率。例如，400倍功率显微镜放大倍数给出0.5毫米的视野。乘以1000得到以微米为单位的视野。对于这个例子，它是500微米。然而，数字显微镜通常使用较窄的视场目标，通常仅使用传统光学显微镜产生与相同放大倍数相同的视场的三分之一。
每像素微米的图像比例是视场除以相机分辨率。将视野视为视图的长尺寸。对于2MP分辨率的1600x1200成像设备 - 相机和上述示例的视野，数字计算为每像素500/1600或0.3微米。
